Xét nghiệm bổ sung kháng nguyên và kháng thể
Bổ sung xét nghiệm kháng nguyên và kháng thể!
Phương pháp xác định chính xác từng thành phần bổ sung của cả ba con đường kích hoạt bổ sung và một số enzyme và bộ điều chỉnh của hệ thống bổ sung có sẵn.
Tuy nhiên, nhiều thử nghiệm chỉ có sẵn trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu.
Có hai loại xét nghiệm bổ sung:
1. Xét nghiệm đo protein bổ sung là kháng nguyên.
2. Xét nghiệm đo hoạt động chức năng của bổ thể.
Các xét nghiệm đo protein bổ sung là kháng nguyên thường đơn giản để thực hiện, rẻ tiền, ít tốn thời gian và có thể được thực hiện trong nhiều phòng thí nghiệm. Nhưng các xét nghiệm kháng nguyên này không cung cấp thông tin về khả năng chức năng của các thành phần bổ sung vì các xét nghiệm kháng nguyên bổ sung này phát hiện cả các thành phần bổ sung hoạt động chức năng cũng như các sản phẩm suy thoái bổ sung.
tôi. Nói chung, xét nghiệm kháng nguyên không nhạy cảm như xét nghiệm chức năng.
ii. Xét nghiệm kháng nguyên không phát hiện mức độ thấp của các thành phần bổ sung trong một số chất dịch cơ thể.
iii. Các xét nghiệm ELISA có sẵn để đo lường các sản phẩm tách của các thành phần hoặc phức chất bổ sung hình thành trong quá trình kích hoạt bổ sung.
iv. Kích hoạt bổ sung thông qua con đường cổ điển có thể được đo bằng cách tuân theo các mức độ C4d và C4 trong huyết thanh.
v. Phép đo ELISA của các phức C1r-C1s-C1INH cung cấp một thước đo kích hoạt bổ sung thông qua con đường cổ điển.
vi. Kích hoạt con đường thay thế có thể được đo bằng phương pháp ELISA bằng cách đánh giá mức độ phức hợp Bb hoặc C3bBbP trong lưu thông.
vii. Kích hoạt con đường cổ điển hoặc thay thế có thể được theo dõi bằng cách đo mức iC3b hoặc dạng hòa tan của màng tấn công phức tạp sC5b6789.
viii. Có sẵn bộ dụng cụ ELISA để đo anaphylotaxin C3a và C5a trong huyết thanh hoặc huyết tương.
Xử lý mẫu cho các xét nghiệm bổ sung:
Xử lý đúng mẫu là rất quan trọng đối với các xét nghiệm chức năng bổ sung. Một số thành phần bổ sung có độ bền cao.
tôi. Đối với hầu hết các xét nghiệm chức năng, huyết thanh, thay vì huyết tương được ưa thích vì các chất thải sắt (như EDTA, heparin) được sử dụng để lấy huyết tương có thể chống lại bổ sung.
ii. Đối với các xét nghiệm chức năng, máu nên đông ở nhiệt độ phòng trong 30-60 phút và sau đó trên băng ít nhất một giờ.
iii. Đối với các thử nghiệm liên kết Clq, máu nên đông trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Các cục máu đông được viền và ly tâm ở 0 ° C đến 4 ° C trong năm phút. Nếu nghi ngờ có kháng thể cryoprecipitating, sự hình thành cục máu đông và ly tâm máu nên được thực hiện ở 37 ° C vì sự cố định bổ sung có thể xảy ra nếu mẫu thử được làm lạnh.
iv. Các mẫu huyết thanh hoặc huyết tương nên được chia thành nhiều phần nhỏ và được bảo quản ngay lập tức ở 40 đến -80 ° C.
v. Khi huyết thanh được chuyển, chúng nên được niêm phong tốt và đặt trong các thùng chứa với một lượng lớn đá khô.
Bổ sung các xét nghiệm chức năng:
Các bộ đệm được sử dụng trong các xét nghiệm chức năng bổ sung là rất quan trọng bởi vì những thay đổi về nồng độ mol và ion kim loại có thể ảnh hưởng đến các giá trị chuẩn bổ sung. Xét nghiệm CH 50 cho con đường bổ sung cổ điển: Xét nghiệm chức năng đơn giản nhất của con đường cổ điển đo tổng bổ sung tán huyết.
Sự vắng mặt của bất kỳ thành phần bổ sung nào dẫn đến tổng hiệu giá bổ sung tán huyết (CH 50 ) bằng không. Hồng cầu cừu thường được sử dụng làm tế bào đích để đo CH 50 hoặc hoạt động chức năng của các thành phần bổ sung biệt lập. RBC của cừu nhạy cảm hơn với kháng thể và bổ sung ly giải qua trung gian so với hồng cầu của các loài khác.
Xét nghiệm AH 50 cho con đường bổ sung thay thế:
Hồng cầu thỏ được sử dụng để đo AH 50 . RBC thỏ rất nhạy cảm với ly giải độc lập kháng thể qua trung gian huyết thanh người.
tôi. Các xét nghiệm CH 50 và AH 50 là các xét nghiệm sàng lọc tuyệt vời để loại trừ sự thiếu hụt di truyền của các thành phần bổ sung.
ii. Hoạt động CH 50 bình thường với giá trị AH 50 giảm dẫn đến các khiếm khuyết trong lộ trình bổ sung thay thế.
iii. Sự thiếu hụt trong các thành phần bổ sung đầu cuối dẫn đến mất cả hoạt động CH 50 và AH 50 .
iv. Sự thiếu hụt đồng hợp tử của một thành phần bổ sung hoàn toàn hủy bỏ xét nghiệm tán huyết.
Mức độ tan máu bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, như nồng độ hồng cầu, độ mong manh (tuổi) của hồng cầu, lượng kháng thể được sử dụng để gây mẫn cảm, bản chất của kháng thể (IgG hoặc IgM), cường độ ion của hệ thống đệm, P H, thời gian phản ứng, nhiệt độ và nồng độ canxi 2+ hoặc magiê 2+ . Giá trị cho các đơn vị CH50 trong huyết thanh người được tính theo nhiều cách, chẳng hạn như phương trình Von krough.
Đo thiếu hụt chức năng của các thành phần bổ sung cá nhân:
Khi tiền sử và triệu chứng của bệnh nhân cho thấy có thể thiếu hụt thành phần bổ sung, có thể cần phải chuẩn độ tán huyết của từng thành phần riêng lẻ. Để tạo ra các hồng cầu, cần có sự hiện diện và kích hoạt của toàn bộ thành phần bổ sung (C1 - C9). Nếu bất kỳ một thành phần vắng mặt, tan máu không xảy ra. Các chế phẩm tinh khiết của từng thành phần bổ sung riêng lẻ là cần thiết để phát hiện sự vắng mặt của một thành phần bổ sung cụ thể trong huyết thanh hoặc huyết tương của bệnh nhân.
Để đo các thành phần bổ sung riêng lẻ, các thành phần tinh chế một phần được yêu cầu. Tuy nhiên, đo lường C4 là một ngoại lệ, vì có sẵn huyết thanh chuột lang thiếu C4 (C4D). Sera từ người thiếu C2 và lợn guinea và thỏ thiếu C6 có sẵn trong một số phòng thí nghiệm.
Các xét nghiệm bổ sung chức năng của từng thành phần rất nhạy cảm và cung cấp thông tin chính xác về hoạt động của một thành phần bổ sung. Nhưng hầu hết các thử nghiệm này được giới hạn trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu.
Đo lường thành phần bổ sung cá nhân bằng phân tích kháng nguyên:
Khuếch tán miễn dịch xuyên tâm là phương pháp phổ biến nhất để định lượng các thành phần bổ sung, chẳng hạn như C3, C4 và yếu tố B. Cần nhớ rằng tất cả các xét nghiệm chức năng bổ sung có thể bị ức chế bởi tác dụng chống bổ sung của huyết thanh (có thể do kháng nguyên- phức hợp kháng thể, heparin, thuốc chelating và immunoglobulin tổng hợp).
Kiểm tra sửa lỗi bổ sung:
Khi có tương tác kháng nguyên-kháng thể, các thành phần bổ sung được kích hoạt và tiêu thụ. Do đó tiêu thụ thử nghiệm in vitro của bổ sung cho thấy sự hiện diện của tương tác kháng nguyên-kháng thể. Nguyên tắc này được sử dụng để phát hiện và đo kháng nguyên hoặc kháng thể trong xét nghiệm cố định bổ sung.
Bài kiểm tra được thực hiện trong hai giai đoạn. Trong giai đoạn đầu tiên, tương tác kháng nguyên-kháng thể xảy ra và bổ sung được tiêu thụ. Trong giai đoạn thứ hai, một hệ thống chỉ thị được sử dụng để phát hiện xem liệu bổ sung có được tiêu thụ hay không trong phản ứng giai đoạn đầu tiên.
tôi. Nếu bổ sung được tiêu thụ trong giai đoạn đầu tiên, điều đó có nghĩa là phản ứng kháng nguyên-kháng thể đã xảy ra trong giai đoạn đầu tiên.
ii. Nếu bổ sung không được tiêu thụ, điều đó có nghĩa là không có tương tác kháng nguyên-kháng thể trong giai đoạn đầu tiên.
Phát hiện kháng thể bằng xét nghiệm cố định bổ sung:
Giai đoạn đầu tiên:
Nồng độ cố định của kháng nguyên và bổ thể đã biết (thường là huyết thanh chuột lang tươi được sử dụng làm nguồn bổ sung) được lấy. Huyết thanh chứa (kháng thể chưa biết) được thêm vào và ủ.
A. Kháng nguyên đã biết + bổ sung + huyết thanh (có kháng thể tương ứng). Các bổ sung được tiêu thụ trong quá trình ủ.
B. Kháng nguyên đã biết + bổ sung -1- huyết thanh (không có kháng thể tương ứng). Bổ sung không được tiêu thụ vì huyết thanh không chứa các kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên đã biết.
Giai đoạn thứ hai:
Hồng cầu cừu được phủ kháng thể hồng cầu chống cừu được thêm vào các ống. Với sự hiện diện của bổ sung, hồng cầu của cừu sẽ bằng cách ly giải (tan máu). Trong trường hợp không bổ sung hồng cầu sẽ không lyse (không tan máu).
A. Vì chất bổ sung được sử dụng trong phản ứng giai đoạn đầu tiên, hồng cầu được bọc kháng thể không bị ly giải. Do đó, không có sự tan huyết cho thấy huyết thanh chứa các kháng thể đặc hiệu chống lại kháng nguyên được sử dụng trong xét nghiệm.
B. Vì bổ thể không được sử dụng trong giai đoạn đầu tiên, hồng cầu được bọc kháng thể được làm tan máu bởi bổ thể ở giai đoạn thứ hai. Do đó, sự hiện diện của tán huyết cho thấy huyết thanh không chứa kháng thể đặc hiệu chống lại kháng nguyên được sử dụng.
Các xét nghiệm cố định bổ sung được sử dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm lâm sàng và nghiên cứu. Virus, kháng thể trong huyết thanh chống nhiễm virut, kháng thể kháng Treponema pallidum gây bệnh giang mai, kháng thể chống nấm (Coccidioidomycosis immitis, Histoplasma capsulatum), kháng thể kháng Mycoplasma pneumoniae
