Thử nghiệm khử amin phenylalanine trên vi khuẩn để tìm ra khả năng khử amin của axit amin (có hình)

Đọc bài viết này để tìm hiểu về xét nghiệm phenylalanine deaminize trên vi khuẩn để tìm ra khả năng khử amin của axit amin!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng khử amin axit phenylalanine, vì chúng có thể tạo ra enzyme 'phenylalanine deaminase'.

Enzim này khử phenylalanine bằng cách loại bỏ nhóm amin của nó, do đó tạo ra axit phenylpyruvic (một loại axit keto) và amoniac (NH ₃ ). Axit phenylpyruvic tạo thành màu xanh lục với dung dịch clorua sắt.

Trong thử nghiệm phenylalanine deaminase, vi khuẩn thử nghiệm được phát triển trên môi trường thạch có chứa phenylalanine. Nếu vi khuẩn có khả năng khử phenylalanine, màu của các chất thay đổi từ màu vàng sang màu xanh lá cây, khi thả dung dịch clorua sắt vào nó.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, máy ấp trứng, thạch phenylalanine, dung dịch clorua sắt (10%), khuẩn lạc cô lập hoặc nuôi cấy vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường thạch phenylalanine (chứa phenylalanine là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml môi trường được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoay ( Hình 7.17).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 7, 2 bằng HCI 0, 1N nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn.

3. Bình được đun nóng để hòa tan hoàn toàn agar trong môi trường.

4. Trước khi nó đông cứng, môi trường trong điều kiện nóng chảy ấm được phân phối vào 5 ống nghiệm (mỗi ống khoảng 20 ml).

5. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Chúng được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp.

7. Sau khi khử trùng, chúng được lấy ra khỏi nồi hấp và giữ ở vị trí xiên để làm mát và đông cứng môi trường, để có được môi trường thạch phenylalanine.

8. Vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng dòng chảy tầng, bằng cách sọc trên bề mặt của các xiên với sự trợ giúp của vòng khử trùng ngọn lửa. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

9. Các xiên cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong lồng ấp.

10. 4-5 giọt dung dịch clorua sắt (10%) được thêm vào mỗi xiên.