Huỳnh quang trong tình huống lai (FISH)

Trong bài viết này, chúng tôi sẽ thảo luận về huỳnh quang trong lai ghép tình huống (FISH).

Đây là một kỹ thuật phòng thí nghiệm được sử dụng để xác định có bao nhiêu bản sao của đoạn DNA cụ thể có trong một tế bào. Nó xác định vùng nhiễm sắc thể cụ thể trong các chế phẩm tế bào học. Trong phòng thí nghiệm, một đoạn DNA được biến đổi hóa học hoặc nhuộm màu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang và khi được kiểm tra dưới kính hiển vi huỳnh quang trông có màu huỳnh quang rất sáng.

Huỳnh quang trong lai tạo tại chỗ đã làm tăng đáng kể độ nhạy, độ đặc hiệu và độ phân giải của phân tích nhiễm sắc thể.

Ưu điểm của kỹ thuật này là rất nhiều nhưng một số được đề cập như sau:

(1) Độ phân giải của phương pháp này tốt hơn nhiều so với phương pháp tạo dải nhiễm sắc thể truyền thống và chiều dài khoảng 2 mega-bazơ (Mb).

(2) Giao thức của kỹ thuật này rất dễ dàng và có thể áp dụng cho cả các ô phân chia cũng như các ô không phân chia. Kỹ thuật này có thể xác định một loạt các đột biến bao gồm xóa, nhân đôi, vô tính và sự hiện diện của nhiễm sắc thể phái sinh. Kỹ thuật này cũng thường được sử dụng để theo dõi bệnh tái phát hoặc còn sót lại ở bệnh nhân ghép tủy xương.

FISH (Huỳnh quang trong tình huống lai) thường được thực hiện trên máu ngoại vi được kích thích cho cả phân tích nhiễm sắc thể và xác định chuyển vị và xóa cụ thể. Ví dụ, nó được sử dụng để chứng minh nhiễm sắc thể Philadelphia (Ph ¹ ) được hình thành bởi sự chuyển vị giữa nhiễm sắc thể 9 và 22 và gây ra bệnh bạch cầu tủy xương mãn tính (CML).

Nó cũng được sử dụng trong việc xác định sự chuyển vị giữa nhiễm sắc thể 8 và 14 gây ra u lympho Burkitt và giữa nhiễm sắc thể 18 và 14 dẫn đến bệnh bạch cầu tế bào B. Nó cũng được sử dụng để chẩn đoán Hội chứng Down.

Trong thủ tục FISH, nuôi cấy tế bào có thể được chuẩn bị. Các nhiễm sắc thể metaphase / prometaphase được cố định trên một phiến kính. Ngoài ra, FISH có thể được sửa đổi để phân tích các hạt nhân xen kẽ. Sau đó, các nhiễm sắc thể bị biến tính; một đầu dò DNA có nhãn sau đó được giới thiệu và sau đó thăm dò lai với nhiễm sắc thể trên slide. Do đó, thuật ngữ lai 'tại chỗ' được đưa ra.

Các đầu dò DNA được dán nhãn bằng fluorochrom, đầu dò như vậy cho tín hiệu huỳnh quang và có thể được nhìn thấy bằng kính hiển vi huỳnh quang. Sự phát huỳnh quang có thể được loại trừ với sự trợ giúp của các bộ lọc gắn trong kính hiển vi huỳnh quang.

Các đầu dò FISH có chiều dài khoảng 40 kilo (kb) và được phát hiện dưới dạng tín hiệu huỳnh quang kép trên mỗi thành viên của cặp nhiễm sắc thể. Dấu chấm kép tương ứng với các tín hiệu từ mỗi hai sắc tố chị em được căn chỉnh.

Trong ứng dụng đơn giản của nó, một mẫu FISH bình thường cho bất kỳ đầu dò nào như vậy sẽ là hai bộ dấu chấm kép, một bộ cho mỗi thành viên của nhiễm sắc thể được ghép đôi thông thường. Những dấu chấm đôi này thường hợp nhất để tạo thành một tín hiệu. Các tế bào đơn nhân cho vùng nhiễm sắc thể trong câu hỏi sẽ chỉ hiển thị một bộ dấu chấm kép trên mỗi nhân, trong khi các tế bào ba sẽ hiển thị ba bộ dấu chấm kép.