Miễn dịch huỳnh quang được sử dụng để phát hiện kháng nguyên trong tế bào
Miễn dịch huỳnh quang được sử dụng để phát hiện các kháng nguyên trong các tế bào!
Các hợp chất huỳnh quang dưới dạng miễn dịch hóa để phát hiện các kháng nguyên trong các mô được giới thiệu bởi Coons (1941).
Miễn dịch huỳnh quang được sử dụng để phát hiện các kháng nguyên trong tế bào hoặc mô (sử dụng các kháng thể đã biết) cũng như phát hiện các kháng thể trong huyết thanh (sử dụng các kháng nguyên đã biết). Huỳnh quang là sự phát xạ ánh sáng của một màu khi chất này tiếp xúc với ánh sáng có màu khác. Khi một chất huỳnh quang bị kích thích với ánh sáng có độ dài sóng đặc biệt, nó sẽ hấp thụ ánh sáng và phát ra ánh sáng có chiều dài sóng khác.
tôi. Fluorescein isothiocyanate (FITC) có độ hấp thụ tối đa của ánh sáng ở mức 490-495nm, và nó phát ra ánh sáng ở 530nm (màu xanh lá cây).
ii. Tetramethyl rhodamine isothiocyanate có độ hấp thụ tối đa của ánh sáng ở 550nm và phát ra ánh sáng màu đỏ (580nm).
a. Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp:
Kỹ thuật này được sử dụng để phát hiện các kháng nguyên trong tế bào hoặc mô.
Các mô, có kháng nguyên chưa biết được cố định vào một phiến kính.
↓
Kháng nguyên được biết đến (đặc trưng cho kháng nguyên quan tâm) kết hợp với FIT (được gọi là liên hợp) được xếp lớp trên mô và được ủ.
tôi. Nếu kháng nguyên quan tâm là trong các mô, liên hợp liên kết với kháng nguyên.
↓
Sau đó slide được rửa để loại bỏ liên hợp không liên kết.
↓
Các slide sau đó được xem dưới kính hiển vi huỳnh quang.
tôi. Màu xanh tươi sẽ được nhìn thấy nếu có kháng nguyên trong mô.
ii. Nếu không có kháng nguyên trong mô, tất cả các liên hợp sẽ được rửa trong bước rửa và do đó, không có màu xanh lá cây.
Kỹ thuật này cũng được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của kháng nguyên vi khuẩn hoặc virus trong các mô bị nhiễm bệnh.
b. Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp:
Kỹ thuật này được sử dụng để phát hiện các kháng thể trong huyết thanh.
Các tế bào chứa các kháng nguyên đã biết được cố định vào phiến kính.
↓
Huyết thanh thử nghiệm được thêm vào trong slide và ủ.
tôi. Nếu có kháng thể (chống lại các kháng nguyên trong tế bào) trong huyết thanh, các kháng thể sẽ liên kết với các kháng nguyên trong tế bào.
↓
Sau đó, slide được rửa để loại bỏ các thành phần huyết thanh không liên kết.
↓
Globulin miễn dịch chống người kết hợp với FITC được thêm vào và ủ.
tôi. Globulin miễn dịch chống người liên hợp FITC sẽ liên kết với các kháng thể trong huyết thanh liên kết với các kháng nguyên tế bào.
↓
Sau khi rửa, slide được xem dưới kính hiển vi huỳnh quang.
tôi. Sự hiện diện của màu xanh lá cây tươi sáng cho thấy huyết thanh có kháng thể chống lại các kháng nguyên trong tế bào.
ii. Sự vắng mặt của màu xanh lá cây cho thấy sự vắng mặt của các kháng thể trong huyết thanh chống lại các kháng nguyên trong các tế bào được sử dụng.
