Thử nghiệm lên men carbohydrate trên vi khuẩn để tìm ra khả năng lên men carbohydrate của chúng

Thử nghiệm lên men carbohydrate trên vi khuẩn để tìm ra khả năng lên men carbohydrate của chúng!

Nguyên tắc:

Một số vi khuẩn có khả năng lên men carbohydrate, đặc biệt là đường. Trong số đó, mỗi vi khuẩn chỉ có thể lên men một số loại đường, trong khi nó không thể lên men những loại khác.

Do đó, đường, một loại vi khuẩn có thể lên men và đường, mà nó không thể là đặc điểm của vi khuẩn.

Thử nghiệm lên men carbohydrate được thực hiện để kiểm tra, riêng rẽ, khả năng vi khuẩn lên men các loại đường như glucose, sucrose, lactose, maltose và xyloza cũng như các dẫn xuất rượu của chúng như aesculin, salicin, adonitol, dulcitol và sorbitol. Nếu vi khuẩn có thể lên men một loại dẫn xuất đường hoặc đường, axit được tạo ra, làm giảm độ pH thay đổi màu của bromocresol tím từ tím sang vàng.

Hơn nữa, nếu đó là một "vi khuẩn gây bệnh", cả axit và khí (C0 ₂ ) đều được tạo ra, trong khi nếu đó là vi khuẩn gây bệnh ', thì chỉ có axit được tạo ra mà không có bất kỳ khí nào. Sản xuất khí được biểu thị bằng sự tích tụ của nó dưới dạng bong bóng trong ống Durham đảo ngược (ống nghiệm thu nhỏ).

Trong thử nghiệm lên men carbohydrate, vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy trong môi trường nước canh có chứa một trong các loại đường hoặc dẫn xuất đường và bromocresol màu tím. Một ống Durham đảo ngược được giữ chìm trong đó.

Nếu vi khuẩn có khả năng lên men đường hoặc dẫn xuất đường, màu của nước dùng chuyển từ màu tím sang màu vàng. Nếu sự tích tụ khí được xem như một bong bóng trong ống Durham, thì đó là một loại vi khuẩn acrogen, trong khi nếu không thấy sự tích tụ khí thì đó là vi khuẩn gây bệnh.

Vật liệu thiết yếu:

Các ống nghiệm, ống Durham, bình nón, phích cắm bông, vòng cấy, nồi hấp, lò đốt bunsen, buồng chảy tầng, bình vứt, lò ấp, nước canh carbohydrate (nước dùng có chứa các chất dẫn xuất đường hoặc đường cụ thể như glucose, sucrose, lactose, maltose, xyloza, aesculin, salicin, adonitol, dulcitol, sorbitol, v.v.), các khuẩn lạc phân lập hoặc nuôi cấy thuần chủng vi khuẩn.

Thủ tục:

1. Các thành phần của môi trường nước canh carbohydrate (chứa carbohydrate cần thiết và màu tím bromocresol là thành phần chính) hoặc bột làm sẵn cần cho 100 ml nước dùng được cân và hòa tan trong 100 ml nước cất trong bình nón 250 ml bằng cách lắc và xoáy (Hình 7.8).

2. Độ pH của nó được xác định bằng cách sử dụng giấy pH hoặc máy đo pH và được điều chỉnh thành 6, 8 bằng cách sử dụng 0, 1N HC1 nếu nhiều hơn hoặc sử dụng NaOH 0, 1N nếu ít hơn. Bình được làm nóng, nếu cần, để hòa tan hoàn toàn các thành phần.

3. Nước dùng được phân phối vào năm ống nghiệm (mỗi ống khoảng 10 ml).

4. Một ống Durham được đặt trong điều kiện đảo ngược vào nước dùng trong mỗi ống nghiệm. Các ống Durham chứa không khí trong đó và nổi. Trong quá trình khử trùng, hơi nước nóng thay thế không khí này, do chúng được ngâm trong nước dùng. Do đó, không cần phải loại bỏ không khí từ bên trong các ống Durham bằng cách đổ đầy nước dùng trước khi khử trùng để giữ cho chúng được ngâm trong nước dùng.

5. Các ống nghiệm được cắm bằng bông, phủ giấy thủ công và buộc bằng chỉ hoặc dây cao su.

6. Các ống canh được khử trùng ở 121 ° C (áp suất 15 psi) trong 15 phút trong nồi hấp. Ngoài ra, 90 ml môi trường cơ bản (môi trường không có carbohydrate) được khử trùng trong nồi hấp và sau đó, sau khi làm mát, 10 ml dung dịch carbohydrate (10%) được khử trùng bằng cách lọc màng được thêm vào. Điều này đặc biệt cần thiết cho carbohydrate nhạy cảm với nhiệt, trải qua quá trình thoái hóa trong quá trình khử trùng bằng nhiệt.

7. Các ống canh được để nguội đến nhiệt độ phòng.

8. Các vi khuẩn thử nghiệm được tiêm vô trùng, tốt nhất là trong buồng chảy tầng, vào nước dùng với sự trợ giúp của một vòng tiêm chủng được khử trùng trên ngọn lửa bunsen. Các vòng lặp được khử trùng sau mỗi lần tiêm chủng.

9. Các ống canh được cấy được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong tủ ấm.